mkgtuНовые технологии / New technologiesNew Technologies2072-09202713-0029МГТУ10.24411/2072-0920-2019-10314mkgtu-324Research ArticleСЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИAGRICULTURAL SCIENCESМетод проточной цитометрии для определения кариотипа выделенных invitro сомаклонов чая (саmelliasinensis (l.) О. Кuntze)Flow cytometry method for determining the kariotype of tea somatic clones isolated in vitro (camellia sinensis (l.) O. Kuntze)ГвасалияМ. В.GvasaliyaM. V.

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории биотехнологии

Candidate of Biology, a senior researcher of the Laboratory of Biotechnology

m.v.gvasaliya@mail.ruСамаринаЛ. С.SamarinaL. S.

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник

Candidate of Biology, a senior researcher

samarinalidia@gmail.comФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт цветоводства и субтропических культур»РоссияFSBSI “All-Russian Research Institute of Floriculture and Subtropical Crops”Russian Federation20193009201903156163Copyright © Гвасалия М.В., Самарина Л.С., 20192019Гвасалия М.В., Самарина Л.С.Gvasaliya M.V., Samarina L.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://newtechology.mkgtu.ru/jour/article/view/324

Методом проточной цитометрии (на приборе цитометр, фирмы Beckman Coulter) проведено изучение генетической изменчивости кариотипа у выделенных in vitro 15 соматических клонов растений чая. Сомаклоны были получены путем индукции геммогенеза из каллусной культуры микропобегов чая, находящихся в течение 8 лет в пересадочной культуре in vitro. Базовой питательной средой для культивирования соматических клонов служила модифицированная минеральная основа по прописи Мурасиге и Скуга (МС), с добавлением регуляторов роста: 6 – БАП – 2,5 мл + НУК – 0,2 мл + ГК – 1,0 мл + мезоинозит – 100 мг. Изменения кариотипа фиксировались по анализу размера генома. В качестве внешнего стандарта использовали генотип чая сорта Колхида 2n = 30 и внешний стандарт Allium cepa 2n = 18 (32,07 пг ДНК). В результате исследований была выявлена изменчивость по размеру генома у трех из 15 сомаклонов чая. У сомаклонов (Sc – 11; Sc – 27; Sc – 33) размер генома составил 7,26-8,70 пг (пикограмм) ДНК в сравнении с контрольным генотипом – диплоидным сортом Колхида, у которого размер генома составил 5,08 пг ДНК. Наличие сомаклональной изменчивости у выделенных по фенотипическим признакам сомаклонов (Sc – 11; Sc – 27; Sc – 33) подтвердилось на уровне кариотипа.

The method of flow cytometry (on Beckman Coulter company cytometer) has been used to study the genetic variation of the karyotype in 15 somatic clones of tea plants isolated in vitro. Somatic clones have been obtained by inducing gemmogenesis from a callus culture of tea micro sprouts, which have been in vitro root-to-seed for 8 years. The Murashige and Skoog modified mineral base (MS) with an addition of growth regulators of 6 – BAP – 2,5 ml + NAA – 0,2 ml + HA – 1,0 ml + mesoinositol – 100 mg have been the basic nutrient medium for cultivating somatic clones. Changes in the karyotype have been recorded by analysis of the genome size. The Colchis tea genotype of 2n = 30 and the Allium cepa 2n = 18 monitor sample (32,07 pg DNA) have been used as external standards. As a result of the studies, genome size variability has been detected in 3 of the 15 tea somatic clones. In somatic clones (Sc – 11; Sc – 27; Sc – 33) the genome size is 7,26-8,70 pg (picograms) of DNA compared with the control genotype of the diploid Colchis variety, whose genome size is 5.08 pg of DNA. The presence of somaclonal variability in somatic clones isolated by phenotypic traits (Sc – 11; Sc – 27; Sc – 33) has been confirmed at the karyotype level.

Саmellia sinensis (L.) О. Кuntzeметод проточной цитометриисомаклональная изменчивость in vitroсомаклоны чаякариотипразмер геномаCamellia sinensis (L.) O. Kuntzeflow cytometry methodsomaclonal variation in vitrotea somatic cloneskaryotypegenome sizeReferencesГвасалия М.В. Биотехнологические приёмы в селекции чая (Camellia sinensis (L.) Kuntze) // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования: материалы XII Международной конференции (6-10 июня 2016 г., Ял-та). М.: РУДН, 2016. С. 308-311.Gvasaliya M.V. Biotechnological techniques in tea selection of (Camellia sinensis (L.) Kuntze) // New and non-traditional plants and prospects for their use: materials of the XII International Conference (June 6-10, 2016, Yalta). M.: RUDN, 2016. P. 308-311.Гвасалия М.В. Сохранение уникальных сортов растений чая (Camellia sinensis (L.) Kuntze) методами биотехнологии // Субтропическое и декоративное садоводство. 2016. Вып. 59. С. 100-106.Gvasalia M.V. Preservation of unique tea varieties (Camellia sinensis (L.) Kuntze) using biotechnological methods // Subtropical and ornamental Gardening. 2016. Issue. 59. P. 100-106.Сомаклональная вариабельность как источник для создания новых сортов пальчатого проса Eleusine coracanа (L.) Gaertn / Баер Г.Я. [и др.] // Цитология и генетика. 2007. №4. С. 9-14.Somaclonal variability as a source for creating new varieties of Eleusine coracan (L.) Gaertn finger millet / Bayer G.Ya. [et al.] // Cytology and Genetics. 2007. No. 4. P. 9-14.Кунах В.А. Эволюция клеточных популяций invitro: особенности, механизмы, движущие силы и следствия // Биология клеток растений invitro и биотехнология: сборник тезисов X Международной конференции (Казань, 14-18 октября). Казань, 2013. С. 47.Kunakh V.A. Invitro cell population evolution: features, mechanisms, driving forces and consequences // Invitro plant cell Biology and Biotechnology: collection of abstracts of X International Conference (Kazan, October 14-18). Kazan, 2013. P. 47.Долгих Ю.И. Сомаклональная изменчивость растений и возможности ее практического использования (на примере кукурузы): автореф. дис. … д-ра биол. наук. М., 2005. 45 с.Dolgikh Yu.I. Somaclonal variability of plants and the possibility of its practical use (on the example of corn): abstr. of diss. ... Dr. of Biology. M., 2005. 45 p.Леонова Н.С. Изменчивость в культуре картофеля (Solanum tuberosum (L.) invitro и возможности её использования в селекции и семеноводстве: автореф. дис. … д-ра биол. наук. Улан-Удэ, 2010. 32 с.Leonova N.S. Variability in potato cultivation (Solanum tuberosum (L.) in vitro and the possibility of its use in Breeding and Seed production: abstract of diss. ... Dr. of Biology. Ulan-Ude, 2010. 32 p.Дитченко Т.И. Культура клеток, тканей и органов растений. Минск: БГУ, 2007. 102 с.Ditchenko T.I. Culture of cells, tissues and organs of plants. Minsk: BSU, 2007. 102 p.Mishiba K.I., Tawada K.I., Mii M. Ploidy distribution in the explant tissue and the calluses induced during the initial stage of internode segment culture of Asparagus officinalis (L.) // In Vitro Cellular and Developmental Biology. Plant. 2006. Vol. 42. P. 83-88.Mishiba K.I., Tawada K.I., Mii M. Ploidy distribution in the explant tissue and the calluses induced during the initial stage of internode segment culture of Asparagus officinalis (L.) // In Vitro Cellular and Developmental Biology. Plant. 2006. Vol. 42. P. 83-88.Nontaswatsri C., Fukai S. Regenerative callus of Dianthus ‘Telstar Scarlet’ showing mixoploidy produce diploid plants // Plant Cell Tissue Organ Culture. 2005. Vol. 83. P. 351-355.Nontaswatsri C., Fukai S. Regenerative callus of Dianthus ‘Telstar Scarlet’ showing mixoploidy produce diploid plants // Plant Cell Tissue Organ Culture. 2005. Vol. 83. P. 351-355.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.